五、致病機(jī)理
ASFV主要在病毒入侵部位附近淋巴結(jié)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。經(jīng)口感染時(shí)，病毒首先在扁桃體和下頜淋巴結(jié)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，然后經(jīng)血液和/或淋巴轉(zhuǎn)移至病毒二次復(fù)制的場(chǎng)所—淋巴結(jié)、骨髓、脾、肺、肝和腎。病毒血癥通常在感染后4~8d出現(xiàn)，由于缺乏中和抗體，將持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。
ASFV最先是在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制的，也會(huì)在內(nèi)皮細(xì)胞，肝細(xì)胞，腎小管上皮細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中復(fù)制。目前還未發(fā)現(xiàn)在B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞復(fù)制。病毒進(jìn)入易感細(xì)胞是通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，然后在細(xì)胞核附近的不同細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制。ASFV易與血液紅細(xì)胞膜和血小板相互作用，能夠引起感染豬的血細(xì)胞吸附現(xiàn)象。
急性病例中的出血機(jī)理是由于在疾病后期，在內(nèi)皮細(xì)胞中復(fù)制的病毒使內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬活性增強(qiáng)引起的亞急性病例中的出血機(jī)理主要是因?yàn)檠鼙诘耐ㄍ感陨叨?。急性病例中淋巴?xì)胞減少的機(jī)理與淋巴器官的T區(qū)淋巴細(xì)胞凋亡有關(guān)，但是還不能證明ASFV能在T細(xì)胞和B細(xì)胞中復(fù)制，這表明會(huì)涉及其他機(jī)制，例如，ASFV感染的巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子或細(xì)胞凋亡因子。
亞急性非洲豬瘟表現(xiàn)為暫時(shí)性血小板減少，肺血液內(nèi)巨噬細(xì)胞的活化可在急性和亞急性非洲豬瘟的后期引起肺水腫(死亡的主要原因)宿主的遺傳因素或者是免疫因素是否決定了野生非洲野豬(疣豬和叢林豬)組織中病毒滴度低和不易察覺的病毒血癥還不是很清楚。相似的，歐洲野豬比家豬表現(xiàn)出較高抗感染能力的原因也不是很清楚
六、臨床癥狀
非洲野豬對(duì)該病有很強(qiáng)的抵抗力，一般不表現(xiàn)出臨床癥狀。不管是急性還是慢性感染，家豬和歐洲野豬表現(xiàn)有明顯的臨床癥狀，ASF的臨床癥狀和許多其他豬的疾病很相似，特別是豬瘟和豬丹毒。
ASFV自然感染的潛伏期大約為4~19d在實(shí)驗(yàn)條件下，潛伏期可以縮短為2~5d，潛伏期的長短與接種的劑量和接種的途徑有關(guān)。發(fā)病率取決于該毒株是引起急性還是慢性疾病，病毒釋放的途徑和是否存在出血(異位顯性或者是出血性腹瀉)。一般發(fā)病率在40%~85%之間。同樣的，死亡率由ASFV毒株的毒力決定。高致病性毒株死亡率可高達(dá)90%-100%；中致病性毒株在成年動(dòng)物能引起20%~40%的死亡率，在幼年動(dòng)物中引起70%~80%的死亡率；低致病性毒株能夠造成10%~30%的死亡率
ASF的臨床癥狀既包括急性的(很少或沒有臨床癥狀的突然死亡)，也包括亞急性的或者是隱性感染，這取決于病毒的毒力、感染劑量和感染途徑。非洲ASFV病毒一般會(huì)導(dǎo)致急性癥狀，但是在一些地區(qū)，可能會(huì)引起亞急性和慢性的感染ASF急性癥狀表現(xiàn)為食欲減退、高溫(40`42℃)、白細(xì)胞減少、肺水腫、淋巴組織的大量壞死和出血、皮下出血(特別是耳朵和兩翼的出血)和高死亡率。在感染后期，可以看到病豬急的呼吸，由于肺部的病變鼻腔分泌大量的黏液在一些臨床病例中可能會(huì)出現(xiàn)鼻出血、便秘、嘔吐，可能還會(huì)有一定程度的腹瀉。有時(shí)會(huì)觀察到肛門出血(黑糞便)。有時(shí)會(huì)看到很明顯的皮疹(大量充血導(dǎo)致皮膚發(fā)紫)或者是青紫的斑點(diǎn)，這些斑點(diǎn)在四肢、耳朵、胸部、腹部和會(huì)陰部位為不規(guī)則的紫色。可能還會(huì)出現(xiàn)血腫和一些壞死組織，這些癥狀在感染中等致病毒株的豬中較為明顯。懷孕母豬常發(fā)生流產(chǎn).
在某些地區(qū)存在著亞急性和慢性病例。亞急性的特征是血小板暫時(shí)性減少、白細(xì)胞減少和廣泛性出血性病變。
高致病性的ASFV毒株主要能夠?qū)е录毙圆±?。中致病性毒株?dǎo)致的臨床癥狀變化多樣：急性、亞急性和慢性。低致病性毒株一般導(dǎo)致慢性的癥狀。
七、病理變化
ASF有很多種病變類型，這取決于病毒毒株的毒力。急性和亞急性以廣泛性的出血和淋巴組織的壞死為病變特征。相反，在一些慢性或者亞臨床病例病變很輕或者不存在病變。
病變發(fā)生的主要部位包括脾臟、淋巴結(jié)、腎臟和心臟。脾臟可呈暗黑色、腫大、梗死和質(zhì)度脆弱，有時(shí)見被膜下出血的大梗死灶。淋巴結(jié)見出血、水腫、易碎常似暗紅色血腫。由于充血和被膜下出血，淋巴結(jié)切面呈大理石樣變。腎臟表面及切面皮質(zhì)部有斑點(diǎn)狀出血，腎孟也有點(diǎn)狀出血。有些病例可見帶有出血的漿液性心包積液。在心內(nèi)、外膜可見斑點(diǎn)狀出血。在急性ASF還能看到一些其他病變，例如，腹腔內(nèi)有漿液出血性滲出物，整個(gè)消化道黏膜水腫、出血。肝臟和膽囊充血，膀胱黏膜斑點(diǎn)狀出血。胸腔積液及胸膜斑點(diǎn)狀及常見肺水腫。腦膜、脈絡(luò)膜、腦組織發(fā)生較為嚴(yán)重的充血。
亞急性與急性的病變很相似，但亞急性的病變較輕，亞急性的主要病變特征是腎臟和淋巴結(jié)有較大的出點(diǎn)，牌臟腫大出血，肺部水種、出血，個(gè)別病例可見間質(zhì)性肺炎。
在急性ASF病例，血管和淋巴器官會(huì)出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，主要包括出血、血管內(nèi)形成微血以及內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，并伴有內(nèi)皮下壞死細(xì)胞的大量聚集。急性和亞急性具有的主要特征病變，牌臟出血性腫大是由于架構(gòu)組織缺失造成的，脾架構(gòu)的缺失是因?yàn)椴《救肭趾蟮膹?fù)制以及脾固有淋巴細(xì)胞壞死造成的。急性ASF的淋巴組織病變主要見于淋巴器官的T細(xì)胞區(qū)，但仍未觀察到ASFV能在淋巴細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。
慢性ASF主要病變特征是呼吸道的變化，但是病變很輕或者不明顯。病變包括纖維素性胸膜炎、胸膜粘連、干酪樣肺炎和淋巴網(wǎng)狀組織增生纖維素性心包炎和壞死性皮膚病變也很常見。
八、診斷
實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是準(zhǔn)確診斷ASF所必需的，因?yàn)锳SF的臨床癥狀和病變與豬的其他一些出血性疾病很相似，比如，豬瘟(豬霍亂)、豬丹毒和敗血性沙門細(xì)菌病。不能根據(jù)臨床癥狀和眼觀病變來判斷是否是ASF。
尸檢發(fā)現(xiàn)，高致病性毒株感染致死的動(dòng)物有很嚴(yán)重的肺水腫和牌腫大(較為嚴(yán)重的疾)變成暗紅色，橫跨整個(gè)腹腔，這是ASF的典型病變，稱之為脾充血性腫大、出血性梗死和出血性脾炎。這種患病動(dòng)物還會(huì)出現(xiàn)淋巴結(jié)出血，特別是胃、肝，腎等器官淋巴結(jié)，出血涉及皮質(zhì)層和髓質(zhì)層，在腎臟、膀胱黏膜、咽和喉、胸膜，心內(nèi)膜及心包膜有點(diǎn)狀出血，心包積液，腹水，胸腔積液，肝瘀血。
很多實(shí)驗(yàn)室檢查方法都可以用來診斷。實(shí)驗(yàn)室診斷常檢查的器官包括淋巴結(jié)、腎臟、脾臟、肺、血液和血清。病變組織可用于病毒的分離、檢測(cè)。組織滲出液和血清主要做抗體檢測(cè)，但也可以用來檢測(cè)病毒粒子。
最方便、最安全、最常用的ASF檢測(cè)方法是直接免疫熒光(DIF)、血細(xì)胞吸附試驗(yàn)(HA和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。
DIF檢測(cè)的是脾臟、肺、淋巴結(jié)、腎臟等組織器官的病毒抗原，檢查可通過組織觸片或冷凍切片進(jìn)行。通過共軛免疫熒光的方法來檢測(cè)ASFV。DIF用來檢測(cè)急性ASF具有快速、經(jīng)濟(jì)和高敏感性的特點(diǎn)。但是，當(dāng)檢測(cè)亞急性或者慢性ASF時(shí)，DIF的敏感性只有40%。這種敏感性的降低可能是由于在組織中形成抗原抗體復(fù)合物，這種組織中的抗原抗體復(fù)合物能阻斷ASFV抗原與標(biāo)記的抗ASFV免疫球蛋白結(jié)合。
由于血細(xì)胞吸附試驗(yàn)(HA)的特異性和敏感性，HA一般用于較寬范圍的檢測(cè)，HA方法應(yīng)該被用來評(píng)估疑似暴發(fā)，特別是當(dāng)其他測(cè)試為否定結(jié)果時(shí)，應(yīng)該用HA方法進(jìn)行確診。血細(xì)胞吸附試驗(yàn)是利用紅細(xì)胞能吸附在體外培養(yǎng)的感染ASFV的巨噬細(xì)胞膜表面。在ASFV誘導(dǎo)的細(xì)胞病變出現(xiàn)前，紅細(xì)胞能在巨噬細(xì)胞周圍形成典型的玫瑰花環(huán)。但是，盡管HA試驗(yàn)是檢測(cè)ASFV的最敏感的方法，但應(yīng)該指出的是，一些ASFV分離株能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的病變，而不能出現(xiàn)血細(xì)胞吸附現(xiàn)象。這些毒株可利用PCR或者DF方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行確定。
ASFV毒株及無血細(xì)胞吸附現(xiàn)象和致病性較低的毒株時(shí)顯示出高度的一致性、特異性和高敏感性。引物和探針都是根據(jù)病毒基因組中的高度保守區(qū)域VP72設(shè)計(jì)的。
當(dāng)出現(xiàn)ASFV抗體時(shí)就證明被感染了，因?yàn)楝F(xiàn)在還沒有行之有效的疫苗。該病急性病例引起高死亡率，在血清學(xué)確診前大量的感染豬就會(huì)死亡。然而，在亞急性疾病，一定比例的豬從感染中恢復(fù)過來，并產(chǎn)生高水平的ASFV特異性抗體免疫球蛋白M(lgM能檢測(cè)到4DP，lgG能檢測(cè)到6~8DP1。病毒感染后抗體在體內(nèi)循環(huán)的存在與病毒相同，大約持續(xù)6個(gè)月,有的在病毒感染幾年后仍能被檢測(cè)到。病毒進(jìn)入體內(nèi)早期就顯現(xiàn)并隨后持續(xù)存在的抗體，使得它們可N用于檢測(cè)亞急性和慢性表現(xiàn)的病例。鑒于同樣原大因，作為病毒撲滅計(jì)劃的一部分，在實(shí)施監(jiān)測(cè)策略方面發(fā)揮很大的作用。很多技術(shù)已經(jīng)適用于ASF抗體的檢測(cè)，但以酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定( ELISA)和兔度印跡實(shí)驗(yàn)最為常用。
ELISA對(duì)于大范圍的ASF血清學(xué)檢測(cè)是最有效的，也適用于針對(duì)該病的防控和撲滅工作。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OE)推薦的 iELISA或商品化的cELISA方法都得到了廣泛應(yīng)用。保存條件較差的樣品可能對(duì) ELISA的敏感性有所影響，但是以一種重組蛋白作為包被抗原的ELSA方法不受這方面的限制。
IB是一種高度特異性、敏感性、簡單易學(xué)的技術(shù)。它曾經(jīng)被用來驗(yàn)證 ELISA試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，而且當(dāng)血清樣品疑似保存較差時(shí)也推薦使用這種方法。
九、免疫學(xué)IMMUNITY
抗ASF感染的免疫機(jī)制目前還不清楚，并且開發(fā)有效疫苗的所有設(shè)想尚未成功。感染ASFV后存活下來的豬只能對(duì)所感染的相應(yīng)病毒具有抗力。同理，接種了毒ASFV疫苗的豬只有在感染同源的強(qiáng)毒病毒時(shí)才能存活，但是，當(dāng)感染異源的病毒時(shí)不能提供有效免疫保護(hù)，顯然，建立保護(hù)性免疫的主要困難是缺少相應(yīng)的中和抗體和病毒毒株之間的高度變異性。
早期的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明在自然感染或者是人工感染豬的血清內(nèi)缺少抵抗ASFV的中和抗實(shí)際上，ASFV的特異性抗體從沒有被證明過是真正意義上的中和病毒的抗體。然而，康復(fù)豬用口蹄疫疫苗免疫時(shí)能產(chǎn)生正常水平的中和抗體該實(shí)驗(yàn)證明了ASFV感染對(duì)體液免疫反應(yīng)不存在負(fù)面影響。
將被ASFV感染的豬或者其他被感染動(dòng)物的血清轉(zhuǎn)移給其他動(dòng)物并不能使其受體動(dòng)物抵抗ASFV的感染。并且最近的一些實(shí)驗(yàn)表明，具有高度抗原性蛋白0、p54和p72的抗體沒有保護(hù)性(Neln等4)。然而，注射抗體的豬能夠表現(xiàn)出對(duì)ASFV的部分抵抗性，比如說，能夠延遲臨床癥狀的表現(xiàn)，能夠改善臨床癥狀，能夠降低病毒血癥水平，還能提高存活率。
體內(nèi)外研究表明抗體在補(bǔ)體介導(dǎo)細(xì)胞溶解和抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)過程中有一定的作用。這些實(shí)驗(yàn)同時(shí)證明自然殺傷細(xì)胞(NK)具有重要的作用，從康復(fù)的豬中分離的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞能夠破壞病毒感染的巨噬細(xì)胞，這表明在免疫過程中細(xì)胞介導(dǎo)的免疫起主要作用，因此，與體液免疫和與細(xì)胞免疫相關(guān)的免疫機(jī)制在抵抗ASFV感染的過程中發(fā)揮作用。
十、預(yù)防和控制
任何情況下，只要有可疑的ASF感染豬，應(yīng)該限制豬及豬產(chǎn)品的流動(dòng)，立即進(jìn)行診斷，要牢記，低致病性的ASFV毒株不能通過其引起的癥狀或病變來證明它們的存在。
目前還沒有比較有效的措施或者疫苗來對(duì)抗自1963年在葡萄牙開始嘗試第一個(gè)弱毒活疫苗，已經(jīng)為尋找多嘗試，但一直沒成功但是，經(jīng)過20多年的努力，在葡萄牙和西班牙撲滅了ASFV，證明疫苗并不是凈化ASF所必需。
因?yàn)锳SFV引起的經(jīng)濟(jì)損失較大，也因?yàn)檫€沒有控制該病的有效疫苗，所以，保護(hù)不存在sF的地區(qū)免受ASFV的侵入變得非常關(guān)鍵流行病學(xué)研完表明，國際機(jī)場(chǎng)和港口中被污染的垃圾是ASFV重要的傳染源(EFSA,2010)，因此，所有飛機(jī)和輪船上剩余的食物都應(yīng)該被焚燒。
在一些發(fā)現(xiàn)溫和型和隱性感染的歐洲地區(qū)比如撒丁區(qū)，防控措施主要依靠控制豬及豬產(chǎn)品的流動(dòng)，結(jié)合廣泛的血清學(xué)調(diào)查來檢測(cè)帶毒豬在ASF流行的非洲地區(qū)，最重要的是控制天然宿主，也就是軟蜱(非洲鈍緣蜱)和疣豬，采取措施阻止它們和家豬接觸。在歐洲東部，有必要認(rèn)識(shí)到自然病毒存儲(chǔ)器在生物循環(huán)中的作用，應(yīng)該控制家豬、野豬以及豬副產(chǎn)品的流動(dòng)。
在畜群中控制和凈化ASF的方法因不同的地區(qū)或者大陸、流行病的形勢(shì)和情況、經(jīng)濟(jì)資源以及鄰近地區(qū)的形勢(shì)特點(diǎn)而不同。在1985-1959期間，西班牙成立了一個(gè)范圍廣泛的組織消滅ASF，這個(gè)組織得到了歐盟的支持。這個(gè)組織能夠取得成功主要是采取了以下的措施：
1、撲滅ASF的暴發(fā)，發(fā)現(xiàn)并屠宰攜帶AsF的動(dòng)物，徹底消滅感染的畜群；對(duì)感染畜群的養(yǎng)殖者進(jìn)行充足的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)助是很有必要的。
2、改善動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施，以防止疾病蔓延，例如，足浴、衛(wèi)生罩、殘留物和泥漿處理。改善生物安全及公共衛(wèi)生措施以避免病毒在奮群之間傳播，這對(duì)撲滅疾病具有重要作用。
3、建立一個(gè)流動(dòng)的獸醫(yī)網(wǎng)絡(luò)隊(duì)伍負(fù)責(zé)管理公共場(chǎng)所的衛(wèi)生；做好動(dòng)物標(biāo)識(shí)；進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查；收集種豬血清樣品進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，在屠宰場(chǎng)做好血清學(xué)控制，以及進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。流動(dòng)獸醫(yī)隊(duì)伍也可以鼓勵(lì)并幫助養(yǎng)豬生產(chǎn)者建立自己的衛(wèi)生協(xié)會(huì)。
4、嚴(yán)格控制動(dòng)物的流動(dòng)，對(duì)用于育肥或者育種的豬進(jìn)行嚴(yán)格檢疫。運(yùn)輸車輛也需要進(jìn)行嚴(yán)格的清洗和消毒。
5、養(yǎng)殖者的直接參與和積極參與根除計(jì)劃是成功撲滅該病的最重要因素。
每個(gè)國家都應(yīng)該設(shè)計(jì)一個(gè)應(yīng)對(duì)ASF意外侵入的計(jì)劃，并時(shí)刻做好準(zhǔn)備以防ASF的暴發(fā)流行。

                                       王亞霆